Тверской областной театр юного зрителя был образован в 1932 году. В конце 1930-х годов тверской областной театр юного зрителя был признан одним из лучших театров CCCH и принял участие в заключительном туре 1-го Всесоюзного смотра театров юного зрителя. В июле 1941 году в связи с началом Великой Отечественной войны Тверской областной театр юного зрителя временно прекратил своё существование.
Театр открылся вновь в 1960 году в здании — памятнике архитектуры XVIII века, которое занимает и поныне. Тверской областной театр юного зрителя в 1960 году возглавил Н. Маршак. В труппу того времени влилась большая группа молодых актёров, выпускников театральной студии при Ленинградском ТЮЗе. В конце 1960-х годов Тверским областным театром юного зрителя руководил Р. Виктюк, событием стал его спектакль «Коварство и любовь» по пьесе Ф. Шиллера.
В разное время коллектив театра возглавляли режиссёры Л. Ящинина, В. Антонов, В. Хлестов, В. Богатырев, С. Кузьмин, Л. Лелянова, В. Лымарев; спектакли оформляли художники: А. Бриклин, И. Сосунов, М. Тихомиров, Я. Зейде, А. Иванов, Е. Бырдин; среди ведущих артистов — М. Бур, М. Петрова, К. Крайнев, М. Миронова, О. Солодухина, В. Яковлев. Тверской областной театр юного зрителя — участник фестивалей «Радуга» в Санкт-Петербурге, «Театр детства и юности — XXI век» в Воронеже, фестиваля камерных спектаклей по произведениями Ф. М. Достоевского в Старой Руссе, Московского международного фестиваля Камерных театров «Славянский венец». Тверской областной театр юного зрителя получал награды в разных номинациях.